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蛋白檢測條帶的常見問題有哪些?如何解決?

 更新時間:2023-10-16    點擊量:1749

你知道在蛋白檢測中條帶的常見問題有哪些?該如何解決嗎?讓我們一起來看看吧!

一、條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期低或高

①當(dāng)條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期低:

原因:目的蛋白經(jīng)過剪切或降解,有相同或相似抗原表位的蛋白被抗體檢測出

解決辦法:樣品準(zhǔn)備時候要在冰上操作;加入更過蛋白酶抑制劑;更換別的抗體

②當(dāng)條帶出現(xiàn)位置比預(yù)期略高:

原因1:蛋白可能被糖基化,或氨基酸基被修飾

解決辦法:使用酶去除可能的蛋白修飾;檢查抗原序列

原因2:可能有融合蛋白

解決辦法:查看表達(dá)序列

原因3:蛋白形成二聚體或多聚體

解決辦法:加強(qiáng)變性條件

二、條帶比較模糊

原因:轉(zhuǎn)膜電壓是否過高;轉(zhuǎn)膜中是否有氣泡殘留;轉(zhuǎn)膜緩沖液組分問題

解決辦法:降低轉(zhuǎn)膜電壓,重新配制緩沖液,在電轉(zhuǎn)之前小心的移除膜和膠之間的氣泡

三、條帶分布不均勻

原因:可能孵育時振蕩不均勻,抗體和封閉液不結(jié)合

解決辦法:離心,分離二抗中的聚合體,確保孵育過程中膜wan全浸沒在抗體中;孵育時確保震蕩均勻,嘗試更換封閉液分離膠聚合不均勻,導(dǎo)致蛋白電泳不一致:調(diào)整聚合條件,分離膠溶液混勻后再進(jìn)行聚合

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