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競(jìng)爭(zhēng)法ELISA的原理是什么?

 更新時(shí)間:2023-11-13    點(diǎn)擊量:2541

你知道競(jìng)爭(zhēng)法ELISA的原理是什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA(也稱抑制或封閉法ELISA)通過(guò)定量某種樣品分析物對(duì)預(yù)計(jì)信號(hào)的干擾,來(lái)測(cè)定該分析物在樣品中的含量,可通過(guò)以下方式進(jìn)行:微孔板用一種分析物或一種對(duì)靶標(biāo)分析物具有特異性的抗體包被(即直接法和間接法),再添加一種有部分某種檢測(cè)的靶標(biāo)分析物,以競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體上的位點(diǎn)。信號(hào)與分析物含量呈負(fù)相關(guān),因此,如果靶標(biāo)分析物的濃度較分析物高,靶標(biāo)分析物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合有xian量的標(biāo)記抗體,參考信號(hào)將會(huì)較靶標(biāo)分析物的濃度較低的情況增強(qiáng)。

競(jìng)爭(zhēng)法的理論基礎(chǔ)是xian量抗體,只有在xian量抗體基礎(chǔ)上,兩種抗原才會(huì)形成競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系。該方法一般用來(lái)檢測(cè)具有較少表位的小分子物質(zhì)。

競(jìng)爭(zhēng)法ELISA是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,一般用于檢測(cè)小分子抗原,其操作步驟為:

1. 將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體

2. 加入待測(cè)檢體,使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

3. 加入帶有酵素之抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

4. 洗去檢體與帶有酵素之抗原,加入酵素底物使酵素呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少,顯色也就越淺。

5. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí),一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA

當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí),一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

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