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保存蛋白質(zhì)的原則及方法有哪些?

 更新時(shí)間:2024-01-08    點(diǎn)擊量:1745

在完成蛋白質(zhì)純化后,如果保存不當(dāng),容易發(fā)生失活和變性的情況,那么你知道保存蛋白質(zhì)的原則及方法有哪些嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、原則

1. 低溫

保存蛋白質(zhì)時(shí),確保在低溫條件下至關(guān)重要。低溫意味著較低的能量水平,有助于減緩蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的熱運(yùn)動(dòng),減少鍵的斷裂可能性。此外,在低溫下,微生物繁殖減緩,潛在的蛋白酶活性降低,從而有助于維持蛋白質(zhì)的活性。

2. 無(wú)菌

在進(jìn)行蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)操作時(shí),務(wù)必佩戴手套。盡管實(shí)驗(yàn)室戴手套通常是為了保護(hù)實(shí)驗(yàn)者自身,但在生化實(shí)驗(yàn)中,蛋白質(zhì)是我們需要保護(hù)的主體。我們皮膚上存在一些蛋白酶,可能會(huì)降解蛋白樣品。此外,皮膚上的其他化學(xué)物質(zhì)也可能污染蛋白樣品。為了防止細(xì)菌生長(zhǎng),最好將蛋白質(zhì)保存在經(jīng)過(guò)滅菌處理的容器中。

3. 濃度

為了提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,建議以較高濃度保存重組蛋白質(zhì),最好保持在1mg/ml以上。高濃度有助于防止蛋白質(zhì)分子附著在塑料或玻璃管壁上。不容忽視的是,疏水性蛋白質(zhì)容易附著在管壁上。

4. 分裝

蛋白質(zhì)需要冷凍保存,但在實(shí)驗(yàn)中常在室溫或更高溫度使用。反復(fù)凍融過(guò)程中產(chǎn)生的冰晶會(huì)損害蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象。為減少凍融次數(shù),建議將純化后的蛋白質(zhì)進(jìn)行分裝保存,每次使用前融化所需量,以確保蛋白質(zhì)樣品經(jīng)歷單次凍融。

二、保存

1. 長(zhǎng)期保存

對(duì)于凍干狀態(tài)的重組蛋白,由于處于wan全脫水的狀態(tài),在不受潮的情況下可以在冰箱中保存數(shù)年。

對(duì)于復(fù)融后的重組蛋白,比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20°C 或 -80°C,六個(gè)月內(nèi)一般是沒(méi)有問(wèn)題的。

(1)分裝有助于zui大程度減少反復(fù)凍融對(duì)抗體和重組蛋白活性的損害,并減少?gòu)耐还苤卸啻挝】赡軐?dǎo)致的污染。

(2)分裝的量最好按一次實(shí)驗(yàn)用完為準(zhǔn),每份至少不能少于10 µl。體積越小,蛋白濃度受蒸發(fā)和管壁吸附影響的可能性越大。

(3)復(fù)融后的分裝重組蛋白如果一次用不完,將剩余母液保存在 4℃,避免再凍起來(lái)。

(4)蛋白工作液應(yīng)當(dāng)在當(dāng)天配制并當(dāng)天使用,最好不要在4℃超過(guò)1天。

2. 短期保存

對(duì)于短期保存,大多數(shù)蛋白質(zhì)可以在4°C下保存,以避免反復(fù)凍融對(duì)活性的影響。然而,4°C保存面臨微生物污染的問(wèn)題。因此,如果保存時(shí)間超過(guò)24小時(shí),建議使用0.22微米的濾膜過(guò)濾樣品,然后在無(wú)菌管中保存。值得注意的是,并非所有蛋白質(zhì)都適合在4°C下保存。

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