產(chǎn)品名稱(chēng)：瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：TD407- 10 (10 次反應(yīng))

     TD407-50 (50 次反應(yīng))

     TD407-200 (200 次反應(yīng))

產(chǎn)品亮點(diǎn)：

• 從瓊脂糖凝膠中快速（15分鐘）高產(chǎn)量地回收超純的DNA.

• 微量柱設(shè)計(jì)使得DNA可以在高濃度下洗脫到最小體積（≥10 µl）.

• 洗脫的DNA非常適合用于DNA連接、測(cè)序、標(biāo)記、PCR等應(yīng)用。

產(chǎn)品組分：

產(chǎn)品特性：

DNA純度-洗脫到的高質(zhì)量、純化的 DNA 尤其適用于 DNA 測(cè)序, DNA 連接, 內(nèi)切酶消化,基因芯片；

DNA大小-50 bp 到 23 kb 之間；

DNA回收率-一般的，可在 10 µl 的水中洗脫出 5 µg 的 DNA 。對(duì)于從 50bp 到10kb 的DNA，回收率為 70%-90% ，對(duì)于從 11kb 到 23kb 的 DNA ，回收率為 50-70%；

樣品來(lái)源-來(lái)自 PCR， 限制性?xún)?nèi)切酶消化， 質(zhì)粒抽提， 激酶反應(yīng)，等的DNA和在TAE 或TBE緩沖的瓊脂糖凝膠切片中的 DNA。

緩沖液制備：

DNA在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在試劑瓶上做好標(biāo)記?。?！

10次反應(yīng)的DNA洗滌液應(yīng)按照標(biāo)簽上的提示添加100%的乙醇；

50次反應(yīng)的DNA應(yīng)添加24ml 100%的乙醇(26 ml 95%的乙醇)到6ml的DNA中；

100次反應(yīng)的DNA應(yīng)添加48ml 100%的乙醇(52 ml 95%的乙醇)到12ml的DNA中；

200次反應(yīng)的DNA應(yīng)添加96ml 100%的乙醇(104 ml 95%的乙醇)到24ml的DNA中。

實(shí)驗(yàn)流程：

以下離心操作步驟的離心力均在 10,000 - 16,000 x g 之間進(jìn)行。

1. 使用刀片或手術(shù)刀把 DNA 片段從瓊脂糖凝膠上切除下來(lái)并且移置到 1.5 ml 小型離心管內(nèi). 注意: 從凝膠上切下的瓊脂糖盡可能的要少.

2. 將 3 倍體積的ADB溶膠液 添加到每 1 體積從凝膠上切下的瓊脂糖切塊中. 例如: 對(duì)于 100 µl (mg) 的瓊脂糖凝膠切塊 ， 添 加 300 µl 的 ADB 緩沖液 .

3. 在 37-55 ℃下溫水浴 10 分鐘直到凝膠切塊溶解. 注意: 確定凝膠切塊解是很重要的步驟. 在溫水浴過(guò)程中可輔以溫和的攪拌有助于凝膠的溶解。如果DNA 大小超過(guò) 8kb ，加熱之后需要額外添加等量膠塊體積的水。例如： 100 µl (mg) 的瓊脂糖凝膠切塊，添加 300 µl 的 ADB 緩沖液.加熱之后添加 100µl 的水。

4. 將溶解的瓊脂糖切塊溶液放到 1號(hào)C 中并把柱套在收集管里.

5. 離心 1 分鐘后. 倒掉過(guò)濾液. 注意: 柱所能容納的樣品體積為 800 µl. 所以, 如果樣品體積超過(guò) 800 µl 時(shí)， 柱就要被多次填充和離心。

6. 添加 200µl 的 DNA洗滌液 到柱中離心 1 分鐘， 去除濾出液.

7. 重復(fù)第 6 步洗滌步驟.

8. 可選步驟： 將收集管中的廢液倒掉，并將 1號(hào)C 套回 收集管 中額外離心2 分鐘，盡量除去洗滌液，以免洗滌液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

8. 直接添加 10 µl DNA洗脫液 到柱基質(zhì)中. 將柱套在 1.5 ml 離心管中離心1 分鐘來(lái)洗脫DNA.

注意: 從柱中洗脫出的 DNA 產(chǎn)量與 pH 和溫度有關(guān). 如果使用水來(lái)洗脫， 確保 pH 是 >6.0. 在向柱中加入水后靜置 1 分鐘可增加較大 (> 6 kb) DNA 的產(chǎn)量.在 60-70 oC 的水中洗脫 DNA 可增加較大DNA (> 10 kb)的產(chǎn)量。

注意: 如果試驗(yàn)需要的話 TE 緩沖液 (10mMTris-HCl ， 1mM EDTA ， pH8.0) 或改進(jìn)的 TE(10mM Tris-HCl ， 0.1mMEDTA ， pH8.5) 也可用來(lái)洗脫.

得到的超純 DNA 可進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)了！

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