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貼壁細胞傳代的方法和注意事項

 更新時間:2024-08-09    點擊量:969
  細胞培養(yǎng)幾乎是所有細胞生物學實驗的基礎。其中,細胞傳代是將部分細胞分離出來,重新接種到新的培養(yǎng)皿中,使細胞重新獲得足夠的營養(yǎng)條件和生長空間的過程。對于貼壁生長的細胞,細胞密度長到80%-90%時,細胞狀態(tài)最好,此時可進行細胞傳代。下面讓我們一起來看看貼壁細胞傳代的方法和注意事項吧!
 
  一、貼壁細胞傳代(以T25瓶為例)
 
  1.顯微鏡下觀察細胞匯合度大于80%即可傳代;
 
  2.將移液管、移液槍、T25培養(yǎng)瓶、1ml槍頭、PBS溶液等放入超凈工作臺,紫外燈滅菌30min后再通風30min;
 
  3.培養(yǎng)基放置37℃水浴鍋預熱;
 
  4.將胰酶和培養(yǎng)基用75%酒精消毒后放入超凈工作臺;
 
  5.在培養(yǎng)箱內(nèi)旋緊培養(yǎng)瓶瓶蓋,拿出細胞,用75%酒精消毒后放入超凈工作臺;
 
  6.吸棄上清液;
 
  7.用5mlPBS液潤洗細胞,吸棄PBS;
 
  8.培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,輕輕晃動使胰酶充分覆蓋細胞層,放入培養(yǎng)箱中孵育;
 
  9.在顯微鏡下觀察細胞解離狀況,細胞明顯變圓、細胞間隙增大,輕輕晃動可呈現(xiàn)流沙狀即可終止;
 
  10.加入4ml培養(yǎng)基終止消化,吹打細胞層表面數(shù)次,使其分散成單個細胞;
 
  11.收集細胞懸液到50ml離心管中,1000-1200r/min離心,3-5min去除胰酶;
 
  12.離心管用75%酒精消毒后放入超凈工作臺,吸棄上清液,用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞;
 
  13.將細胞懸液按推薦傳代比例分裝到培養(yǎng)瓶,補充適量培養(yǎng)基,搖晃使細胞分布均勻,并做好標記;
 
  14.在顯微鏡下觀察細胞密度及狀態(tài),把細胞放回培養(yǎng)箱,旋松瓶蓋以便進行氣體交換。
 
  二、注意事項:
 
  1.PBS潤洗細胞時,從與貼壁細胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入PBS,避免沖刷到細胞層;
 
  2.不同細胞的胰酶所需消化時間不一樣,消化時間根據(jù)細胞貼壁特性而定,可每30s觀察一次。
 
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