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PCR DNA聚合酶都有什么?

 更新時間:2024-10-09    點擊量:637

DNA聚合酶是催化DNARNA為模板合成DNA的一類酶的總稱,又稱DNA依賴的DNA聚合酶(DNA—dependent DNA polymeraseDNA pol),它是以親代DNA為模板,催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一類酶。此酶是美國科學家Arthur Komberg1957年在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)的,被稱為DNA聚合酶DNA polymerase Ⅰ,簡稱polⅠ)以后陸續(xù)在其他原核生物及真核生物中找到了多種DNA聚合酶。這些聚合酶的共同特點是:它們都能把脫氧核糖核苷酸(dNTP)連續(xù)的加到雙鏈DNA引物鏈的3'-羥基末端上,催化核苷酸的聚合,形成新的DNA鏈。

PCR DNA聚合酶都有什么?

PCR DNA聚合酶的種類包括Taq DNA聚合酶、高保真DNA聚合酶、熱啟動DNA聚合酶、等溫擴增DNA聚合酶和鏈置換DNA聚合酶等。

一、PCR DNA聚合酶

1. Taq DNA聚合酶

特點:Taq DNA聚合酶是從水生棲熱菌中分離提取的,具有很高的熱穩(wěn)定性,能夠在70℃保持活性,適合標準的PCR反應。它缺乏3’→5’核酸外切酶活性,因此無校正功能,容易產(chǎn)生錯配堿基。

應用:用于常規(guī)PCR擴增,尤其是當對保真度要求不高時。其擴增產(chǎn)物3’末端帶有A尾,可直接用于TA克隆。

2. 高保真DNA聚合酶

特點:這類酶具有3’→5’核酸外切酶活性,能夠校正錯誤插入的核苷酸,顯著降低錯配率。常見的有Pfu、KODPhusion等。

應用:適用于需要高保真度的應用場景,如基因克隆、定點突變、測序及SNP分析等。例如,Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase具有很的保真性和擴增效率,適用于復雜模板的高保真擴增。

3. 熱啟動DNA聚合酶

特點:通過化學修飾或抗體結(jié)合,在室溫下抑制其活性,直到高溫激活。這種酶可減少非特異性擴增,提高PCR反應的特異性和靈敏度。

應用:適用于需要高特異性擴增的實驗,如多重PCR、復雜模板的擴增等。例如,Hieff Union Hotstart High Specific Taq DNA Polymerase能夠有效防止非特異性擴增,并提高擴增特異性。

4. 等溫擴增DNA聚合酶

特點:這類酶具有鏈置換活性和5’→3’聚合酶活性,能在恒溫條件下進行快速、高效、特異性擴增。

應用:適用于等溫擴增技術(shù),如LAMP、CPA、RCA等。例如,Bst Ⅱ Plus DNA Polymerase具有更高的靈敏度、擴增效率和穩(wěn)定性,且增加了dUTP耐受性,非常適合基于等溫擴增技術(shù)的應用。

5. 逆轉(zhuǎn)錄DNA聚合酶

特點:這類酶以RNA為模板,按5’→3’方向合成互補DNAcDNA),常用于研究基因表達。

應用:用于將RNA轉(zhuǎn)錄為DNA,如RT-PCR、qRT-PCR等。常用的逆轉(zhuǎn)錄酶包括M-MLVAMV。

6. 鏈置換DNA聚合酶

特點:具有強鏈置換活性,可以在DNA復制過程中取代舊鏈,常用于等溫擴增技術(shù)。

應用:適用于基于鏈置換的等溫擴增反應,如LAMP和滾環(huán)擴增(RCA)。例如,Bca best聚合酶和phi29 DNA聚合酶在擴增速度、產(chǎn)量和熱穩(wěn)定性方面都有優(yōu)異的表現(xiàn)。

二、凡知醫(yī)學DNA聚合酶推薦:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

FG2104

凡知醫(yī)學高保真DNA聚合酶

250 units

FG2103

凡知醫(yī)學熱啟動Taq Pro DNA聚合酶

100U;500U;2500U

FG2101

凡知醫(yī)學Taq DNA聚合酶

500U;1KU



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