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三一造血STEMERY——人 γδT 細胞高效擴增試劑盒說明書

 更新時間:2024-10-11    點擊量:582

一、產(chǎn)品介紹 

中文名稱 γδT 細胞高效擴增試劑盒 

英文名稱Human γδT cell robust expasion kit 

編號 CT-004 

包裝規(guī)格 2L/

試劑盒組成

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預期用途

適用于從人新鮮外周血、濃縮白細胞來源的單個核細胞以及凍存的單個核細胞在體外擴增成 γδT 細胞。

貯藏條件與有效期】GD-IGD-II,GD-IV 置于 2-8°C 保存,有效期為 12 個月;GD-III 置于-20°C 保存, 有效期為 24 個月,置于 2-8°C 保存,有效期則為 3 個月,并勿反復凍融; 生產(chǎn)日期,有效期至:見標簽。

【產(chǎn)品特性 γδT 細胞具有在體內(nèi)快速反應的特性,在受到刺激時,會先于 αβ-T 細胞釋放促炎性細胞因子 (IFN-γ TNF-α 等)。γδT 細胞能夠激活 NK 細胞的腫瘤細胞毒作用,與 DC 細胞互刺激成熟, APC 細胞抗原呈遞的功能,激活 αβ-T 細胞的免疫效應,γδT 細胞的殺傷作用具有非 MHC 限制性, 廣泛的殺瘤譜,已知對至少十幾種腫瘤細胞有殺傷作用。 γδT 細胞在人外周血含量很少(1-5%),本產(chǎn)品能夠?qū)⑼庵苎械膯蝹€核細胞大規(guī)模擴增成 γδT 細胞,具有擴增效率高,目的細胞百分比高的特點,起始單個核細胞經(jīng)過 14 天培養(yǎng),總細胞 數(shù)可以擴增約 30±10 倍左右,γδT 細胞其純度可達 80%左右,并且全程無血清培養(yǎng)為基礎(chǔ)和臨床 研究使用 γδT 細胞提供一個有力的產(chǎn)品。

微信截圖_20241011150333.png

二、操作步驟

1.  0 天,將制備好的單個核細胞(MNC)按 1.5-2.0M cells/mL 細胞密度鋪于 T-75 瓶中,加 入 GD-IV 培養(yǎng)基 45mL,GD-I 500μL,GD-II 100 μL,GD-III 5mL 以及濃度為 100 IU/mL IL-2 50μL(即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL); 注意:

1)IL-2 使用 1mL GD-IV 培養(yǎng)基溶解(IL-2 溶解后濃度為 100 IU/mL),存于 2-8°C 冰箱, 存放時間不超過兩周。建議將 IL-2 溶解后分裝于無菌試劑管后保存于-20°C 冰箱,使用時溶解 即可,注意不要反復凍融,且不可使用長期置于 2-8°C IL-2,否則將嚴重影響本試劑盒的擴 增效果;

2)請勿將 GD-III -20°C 冰箱中取出后直接置于 37°C 中,GD-III 溶解wan后,輕輕搖晃瓶 身,使其溫度與成份均一,搖晃時,請小心避免氣泡產(chǎn)生;

  3)在細胞鋪加后與第 3 天補液之前的這段時間內(nèi),盡可能不要移動培養(yǎng)瓶,以免使其受到溫度 變動,震蕩等物理因素的干擾。

2.  3 天(3×24h),補加 95ml GD-IV 培養(yǎng)基,GD-III 5mLIL-2 100μL(即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL)轉(zhuǎn)入細胞培養(yǎng)袋,此時袋子含 150mL 培養(yǎng)液; 注意:為使更多的細胞轉(zhuǎn)入到培養(yǎng)袋中,可先將 T-75 瓶中的細胞吹打均勻,全部轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中, 再用部分新鮮配制的培養(yǎng)液潤洗培養(yǎng)瓶,并再次轉(zhuǎn)入培養(yǎng)袋中,最后補齊培養(yǎng)液即可;

3.  5 天,往培養(yǎng)袋補加 150mL GD-IV 培養(yǎng)基,GD-III 7.5mLIL-2 150μL(即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL),此時袋子含 300mL 培養(yǎng)液;

4.  7 天,往培養(yǎng)袋補加 300mL GD-IV 培養(yǎng)基,剩余的 GD-III,IL-2 300μL(即 IL-2 終濃度 為 1000IU/mL),然后分成兩袋,此時每個袋子含 300mL 培養(yǎng)液;

5.  9 天,分別往培養(yǎng)袋補加 300ml GD-IV 培養(yǎng)基,IL-2 300μL(即 IL-2 終濃度為 1000IU/mL), 此時袋子含 1100mL 培養(yǎng)液; 注意:D5-9 為細胞增殖高峰期,補液時注意根據(jù)細胞生長狀態(tài)和密度添加培養(yǎng)基以保持細胞良 好生長狀態(tài)。

6.11 天,分別往每個培養(yǎng)袋補加 400mL GD-IV 培養(yǎng)基,IL-400μL(即 IL-2 終濃度 1000IU/mL) 

7.13-14 天,收獲目的細胞。

注意事項

1)在使用本試劑盒時,可先將 GD-I GD-II 試劑管低速離心(如 1000g/min 離心 1min 等), 確保試劑足量;

2)由于樣本之間的差異性,在按上述操作說明操作時,可根據(jù)具體細胞生長狀態(tài),調(diào)整補液時 間;

  3)在使用本試劑盒時,由于樣本之間的差異性,每個樣本的細胞長速與誘導率存在差異。

 需要,請聯(lián)系三一造血代理——天津益元利康生物科技有限公司。

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