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RAW 264.7細胞傳代和凍存

 更新時間:2024-10-16    點擊量:614

一、傳代培養(yǎng)

傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿(瓶)內(nèi),再進行培養(yǎng)的過程。對單層培養(yǎng)而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。傳代培養(yǎng)中的細胞傳代培養(yǎng)(subculture),當原代培養(yǎng)成功以后,隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。

二、RAW264.7細胞傳代步驟

在進行RAW264.7細胞傳代時,首先需要將舊培養(yǎng)基棄去,并使用PBS洗滌細胞1-2次,確保細胞表面干凈。然后向培養(yǎng)瓶中加入2 mL PBS,使其浸潤所有細胞,輕輕吹打細胞以將其吹下,將細胞懸液收集至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘,棄去上清液,再加入1-2 mL培養(yǎng)基并充分重懸細胞。

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接下來,將懸液按1:2的比例進行傳代至新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,并將其置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。通過這些步驟,可以有效地進行RAW264.7細胞的傳代操作,促進細胞的增殖和持續(xù)生長,以維持細胞系的活力和穩(wěn)定性。傳代是細胞培養(yǎng)中的重要步驟,有助于確保RAW264.7細胞在研究中的連續(xù)性和穩(wěn)定性。

、RAW264.7細胞凍存具體步驟

1. 首先需要收集細胞并將其轉(zhuǎn)移至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘,將上清液棄去。

2. 隨后,向細胞中添加1 ml細胞凍存液(包含20% FBS的培養(yǎng)基和10% DMSO),輕輕吹打混勻,將1 ml細胞懸液吸取至凍存管中,并做好詳細的標記。

3. 將凍存管置于梯度降溫凍存盒中,并將其放入-80℃冰箱中過夜,確保冷凍過程緩慢進行。

4. 隨后,將已凍存的細胞轉(zhuǎn)移至液氮罐中進行長期儲存,以確保細胞的保存和使用。通過這些步驟,可以有效地進行RAW264.7巨噬細胞的凍存,以供日后實驗或應急需求使用。

四、推薦使用產(chǎn)品

凍存液推薦:WAKO無血清凍存液

實驗中會用到的PBS推薦:

產(chǎn)品名稱

品牌

價格

PBS速溶顆粒

中科百抗

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PBS-T速溶顆粒

中科百抗

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PBS磷酸鹽緩沖液

中科百抗

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