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細(xì)胞凋亡的檢測(cè)

 更新時(shí)間:2024-11-19    點(diǎn)擊量:416
  一、光學(xué)顯微鏡觀察
 
  凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染,形成致密質(zhì)塊,有時(shí)可碎裂。
 
  檢測(cè)方法:細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色,在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變,結(jié)合顯微測(cè)量工具可作凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。
 
  二、視頻時(shí)差顯微技術(shù)
 
  細(xì)胞培養(yǎng)中常用,通過相差顯微鏡可動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過程,尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化。
 
  檢測(cè)方法:收集2×10^5細(xì)胞/ml培養(yǎng)的細(xì)胞,置于多孔培養(yǎng)板,加入凋亡誘導(dǎo)劑,在帶有自動(dòng)攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動(dòng)態(tài)改變,每隔1分鐘作序列攝影,連續(xù)24小時(shí)。如同進(jìn)行熒光染色,可參熒光晃微鏡下觀察和攝影。
 
  三、電子顯微鏡觀察
 
  雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時(shí)期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡經(jīng)典、可靠的方法,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。
 
  檢測(cè)方法:透射電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定,丙酮脫水,環(huán)氧樹脂包埋,超薄切片,醋酸枸椽酸電子又重染色,透射電鏡觀察。掃描電鏡標(biāo)本經(jīng)戊二醛和二酸雙重固定,乙醇逐級(jí)脫水,二氧化碳臨界點(diǎn)干燥,真空噴金,掃描電鏡觀察。
 
  四、流式檢測(cè)
 
  流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞是通過檢查其光射特征及熒光參數(shù)時(shí)行的。細(xì)胞穿過流式細(xì)胞儀的激光束集點(diǎn)時(shí)使激光發(fā)生散射,分析散射光可以提供細(xì)胞大小及結(jié)構(gòu)的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種,前向散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞大小、體積相產(chǎn),側(cè)向散射光的強(qiáng)度與細(xì)胞結(jié)構(gòu)的析射性、顆粒性(granu-larity)有關(guān)。
 
  檢測(cè)方法:獲取密度1×10^6細(xì)胞/ml左右的細(xì)胞懸液,精洗,固定,熒光染料染色,上流式細(xì)胞儀分析。
 
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