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IHC未染色或無信號原因分析

 更新時間:2024-11-21    點擊量:432

IHC未染色或無信號的原因:

一、?抗體問題?:

抗體與一抗或二抗不兼容、抗體濃度不合適、抗體失效或儲存不當(dāng)?shù)榷紩?dǎo)致無染色。例如,使用抗一抗種屬來源的二抗,確認(rèn)二抗是否識別一抗的亞型;使用更高濃度的抗體或延長孵育時間;設(shè)置陽性對照,確??贵w仍然有效?。

二、?抗原修復(fù)不足?:

固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位,導(dǎo)致抗原修復(fù)不足。使用微波或壓力鍋進行抗原修復(fù),確保使用新鮮配置的修復(fù)液?。

三、?樣本處理不當(dāng)?:

樣本存放時間過長、切片制備不當(dāng)(如脫蠟不ce)、組織切片干片等都會影響染色效果。建議使用新鮮制備的切片,并確保在實驗過程中保持切片濕潤?。

四、?實驗操作問題?:孵育時間不足、封閉不充分、抗體稀釋比例不當(dāng)?shù)炔僮鲉栴}也會導(dǎo)致無染色。嚴(yán)格按照驗證過的實驗步驟進行操作,確保每個步驟都正確執(zhí)行?。

五、?試劑問題?:

試劑過期、試劑保存不當(dāng)或試劑質(zhì)量不佳都會影響染色效果。使用前檢查試劑的有效期和保存條件,確保試劑質(zhì)量?。

六、透化:

抗體和緩沖液在組織切片中的透化不足。建議在緩沖液中使用0.5%~1%Triton。

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?解決IHC未染色或無信號的建議?:

1.?確認(rèn)抗體兼容性?:使用與一抗種屬匹配的二抗,確認(rèn)二抗是否識別一抗的亞型。

2.?優(yōu)化抗原修復(fù)?:使用微波或壓力鍋進行抗原修復(fù),確保使用新鮮配置的修復(fù)液。

3.?正確處理樣本?:使用新鮮制備的切片,確保在實驗過程中保持切片濕潤,避免干片。

4.?嚴(yán)格操作步驟?:嚴(yán)格按照驗證過的實驗步驟進行操作,確保每個步驟都正確執(zhí)行。

5.?檢查試劑質(zhì)量?:使用前檢查試劑的有效期和保存條件,確保試劑質(zhì)量。

通過以上方法,可以有效解決IHC實驗中未染色或無信號的問題,提高實驗的成功率和準(zhǔn)確性。

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