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慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細胞全流程詳解

 更新時間:2025-02-06    點擊量:212

慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細胞全流程詳解

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一、細胞種板

將細胞種在12孔板中,每孔1.5×10^5個細胞。每孔加入1ml wan培養(yǎng)基。
二、病毒感染

1. 待細胞生長至30%50%時開始轉(zhuǎn)染。
2. 將病毒從冰箱取出,放在冰上融化。
3. 打開生物安全柜,關(guān)閉風(fēng)機,戴好帽子和口罩。
4. 棄去培養(yǎng)基,用PBS洗三次。
5. 每孔加入500ul wan培養(yǎng)基。
6. 根據(jù)公式計算每孔所需病毒量:每孔病毒量(μL= MOI x 細胞數(shù) / 病毒滴度(TU/mL× 1000。

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7. 4小時后,再向孔板中加入500ul wan培養(yǎng)基,補足1ml

三、換液


 感染后24小時,吸去含毒的培養(yǎng)液,換上新鮮的 wan培養(yǎng)液,繼續(xù)37℃培養(yǎng)。

四、觀察與篩選

感染后48小時,通過熒光顯微鏡初步觀察GFP表達效率。一般感染后72小時達到表達高峰。
對于攜帶Puromycin抗性基因的病毒,換上含適當(dāng)濃度Puromycin的新鮮 wan培養(yǎng)液,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞株。

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