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簡石生物感受態(tài)細胞TT2001使用指南

 更新時間:2025-02-24    點擊量:86


一、簡石生物感受態(tài)細胞TT2001產(chǎn)品概述

簡石TT2001酵母感受態(tài)制備與轉(zhuǎn)化試劑盒基于分子生物學"膜通透性-遺傳調(diào)控"雙效機制開發(fā),適用于釀酒酵母、畢赤酵母等多種真菌的高效遺傳轉(zhuǎn)化。通過ISO/TC276標準驗證,單次反應可實現(xiàn)1×10?–1×10? CFU/μg DNA的轉(zhuǎn)化效率,兼容環(huán)狀/線性DNA及未純化酶切產(chǎn)物。

二、簡石生物感受態(tài)細胞TT2001技術(shù)原理

1. 膜通透性調(diào)控

  • 化學誘導法(CaCl?/Mg2+體系):通過低滲溶液誘導細胞膨脹,Ca2+與磷脂雙分子層作用形成孔道復合物,降低膜阻抗至<5 kΩ·cm2。

  • 電穿孔法(兼容選項):施加10-16 kV/cm電場,形成瞬時孔隙(10-100 nm),Zeta電位變化促進DNA內(nèi)流。

2. 遺傳穩(wěn)定性控制

  • 酶活性平衡:轉(zhuǎn)化窗口期(0-30 min)限制性內(nèi)切酶活性抑制>90%,DNA修飾酶效率提升至5.2 U/μg。

  • 同步復制調(diào)控:誘導S期特異性啟動子(如GAL1)激活,染色體凝集度降低40%,實現(xiàn)質(zhì)粒高效復制。

三、簡石生物感受態(tài)細胞TT2001標準化操作流程

樣本制備

  1. 取OD600=0.6-0.8對數(shù)期酵母,冰上預冷15 min

  2. 加入Lambda DNA酶切液檢驗膜完整性(合格樣本DNA結(jié)合率>85%)

感受態(tài)誘導

  • 化學法:100 mM CaCl?處理90 s(0-4℃),透射電鏡顯示膜流動性提升38%

  • 電轉(zhuǎn)法:0.2 cm電擊杯1.8 kV脈沖(時間常數(shù)4.5-5.5 ms)

轉(zhuǎn)化步驟

  1. DNA與細胞冰浴共孵育20 min

  2. 42℃熱激90 s(化學法)或直接復蘇(電轉(zhuǎn)法)

  3. 30℃選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h

四、簡石生物感受態(tài)細胞TT2001關(guān)鍵性能指標

參數(shù)測試結(jié)果檢測標準
轉(zhuǎn)化效率1.2×10? CFU/μg pYES2GB/T 37877-2019
細胞存活率92.3±3.5%CCK-8法
線性DNA兼容性≥80%環(huán)狀DNA效率1 kb同源臂測試
凍存穩(wěn)定性(-80℃)6個月效率衰減<5%ISO 13485

5. 五、簡石生物感受態(tài)細胞TT2001保存指南

  • 未誘導細胞:4℃ PBS懸浮保存≤72 h

  • 感受態(tài)細胞:-80℃甘油保護液保存,建議分裝為50 μL/管

  • 注意事項

    • 避免反復凍融(每次凍融轉(zhuǎn)化效率下降15-20%)

    • 運輸過程需用干冰維持-60℃以下低溫鏈

六、簡石生物感受態(tài)細胞TT2001實驗優(yōu)化建議

  • 疑難樣本處理:纖維素酶預處理(5 U/mL,30 min)可提升絲狀真菌轉(zhuǎn)化效率

  • 大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(>15 kb):添加100 μM DTT及5% PEG4000增強DNA穩(wěn)定性

  • 自動化適配:兼容Beckman Biomek i7工作站液體處理系統(tǒng)

簡石感受態(tài)細胞代理——天津益元利康生物科技有限公司,成立于2018年,坐落于天津經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、細胞生物學等多個方向,專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產(chǎn)品銷售,經(jīng)營的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、BioLegend等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價美的產(chǎn)品、及時到位的服務,努力成長為生命科學和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應商。

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