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間充質(zhì)干細(xì)胞的分離——脂肪MSC分離培養(yǎng)

 更新時(shí)間:2025-02-28    點(diǎn)擊量:145

問充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是一種源自中胚層的多能干細(xì)胞,能夠從骨、脂肪、臍帶、胎盤、臍血、皮膚等多樣的組織里分離獲取,具有強(qiáng)大的增殖能力和多向分化潛能,不僅能分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等,還能分化為肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、胰島細(xì)胞等多種細(xì)胞類型。間充質(zhì)干細(xì)胞在組織工程、基因治療和免拉治療等諾多方面展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景,為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域帶來了新的希望和突破方向,對(duì)于多種疾病的治療和研究都有著重要意義。

一、小鼠脂肪組織獲取

1.3天齡到4周齡(推薦小周齡)小型,頸椎脫白法處死后于75%酒精浸10min。

2.將小鼠橫向,背面朝上放置,背部中心嬰向剪開皮膚1cm;沿著開口處撕去腹股溝皮膚,暴露對(duì)稱的腹股溝部位白色胎肪組織,鈍性剝離。

二、胎肪MSC分離培養(yǎng)(酶消化法)

1. 消化:取脂肪組織25mL,4°℃ PBS沖洗3次,去除筋膜及紅細(xì)胞,眼科剪剪碎,4°CPBS沖洗3次,每5mL脂防分裝入50mL離心管,加入2倍體積的0.075961型膠原,37℃恒溫?fù)u床以80r/min的搖速震蕩消化1h,待充分消化后,加入與酶等體積的含10%FBSDMEM-F12完quan培養(yǎng)基終止消化。

2. 離心與計(jì)數(shù):300g,離心10min,去除上層未消化的脂肪組織、油脂及中層潔液,5mL紅細(xì)胞裂解液重懸沉淀,室溫靜置5min,200g,離心5min,去除上清液,完quan培養(yǎng)基重懸沉淀,200日網(wǎng)過濾后,取樣計(jì)數(shù),根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果調(diào)整細(xì)胞濃度,最終以(1-5)x101/cm2接種于培養(yǎng)皿中,置于37℃℃,5%C0,培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3. 接種培養(yǎng):48h后換液,之后每3d換一次液,待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%-90%融合時(shí),用體積分?jǐn)?shù)0.25%膚蛋白酶消化后按1:2傳代培養(yǎng)。

 

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