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間充質干細胞的分離——脂肪MSC分離培養

 更新時間:2025-02-28    點擊量:490

問充質干細胞(MSC)是一種源自中胚層的多能干細胞,能夠從骨、脂肪、臍帶、胎盤、臍血、皮膚等多樣的組織里分離獲取,具有強大的增殖能力和多向分化潛能,不僅能分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞等,還能分化為肌細胞、肝細胞、胰島細胞等多種細胞類型。間充質干細胞在組織工程、基因治療和免拉治療等諾多方面展現出巨大的應用前景,為醫學領域帶來了新的希望和突破方向,對于多種疾病的治療和研究都有著重要意義。

一、小鼠脂肪組織獲取

1.3天齡到4周齡(推薦小周齡)小型,頸椎脫白法處死后于75%酒精浸10min

2.將小鼠橫向,背面朝上放置,背部中心嬰向剪開皮膚1cm;沿著開口處撕去腹股溝皮膚,暴露對稱的腹股溝部位白色胎肪組織,鈍性剝離。

二、胎肪MSC分離培養(酶消化法)

1. 消化:取脂肪組織25mL4°℃ PBS沖洗3次,去除筋膜及紅細胞,眼科剪剪碎,4°CPBS沖洗3次,每5mL脂防分裝入50mL離心管,加入2倍體積的0.075961型膠原,37℃恒溫搖床以80r/min的搖速震蕩消化1h,待充分消化后,加入與酶等體積的含10%FBSDMEM-F12完quan培養基終止消化。

2. 離心與計數:300g,離心10min,去除上層未消化的脂肪組織、油脂及中層潔液,5mL紅細胞裂解液重懸沉淀,室溫靜置5min200g,離心5min,去除上清液,完quan培養基重懸沉淀,200日網過濾后,取樣計數,根據計數結果調整細胞濃度,最終以(1-5)x101/cm2接種于培養皿中,置于37℃℃5%C0,培養箱中培養。

3. 接種培養:48h后換液,之后每3d換一次液,待細胞生長至80%-90%融合時,用體積分數0.25%膚蛋白酶消化后按1:2傳代培養。

 

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