細胞分選試劑盒的核心目標是從混合細胞群體中高效、特異地分離目標細胞,其主流技術主要基于磁珠分選法(如MACS技術)或熒光激活細胞分選法(FACS)。今天詳細介紹一下MACS:
一、MACS核心原理
利用抗體-磁珠復合物特異性結合目標細胞表面標志物,通過磁場吸附實現分離。
二、MACS分選流程
1.標記磁珠:
試劑盒提供預先偶聯特異性抗體(如抗CD4、CD19)的磁性微珠。
將磁珠與細胞懸液混合,磁珠通過抗體與目標細胞表面抗原結合。
2.磁場分離:
將混合液置于磁力架(如Miltenyi的MACSiMAG分離器)中,磁場吸附磁珠標記的細胞。
未標記的細胞(非目標細胞)保留在溶液中,通過傾倒或吸棄去除。
3. 收集目標細胞:
移除磁場后,用緩沖液洗脫磁珠標記的細胞,獲得高純度目標群體。
三、MACS分選模式
正選(Positive Selection):直接標記并分離目標細胞(如CD4+ T細胞)。
負選(Negative Selection):標記并去除非目標細胞,剩余未標記的即為目標細胞(如未成熟的造血干細胞)。
四、MACS優勢
無需復雜儀器,操作簡單快速(約30分鐘)。
細胞活性高(>90%),適合后續功能實驗(如培養、移植)。
五、應用場景
免疫學研究:分離T細胞、B細胞、NK細胞等亞群。
腫瘤治療:分選CAR-T細胞或腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)。
干細胞研究:富集造血干細胞或間充質干細胞。
六、注意事項
抗體選擇:需驗證抗體與目標物種及細胞類型的兼容性。
細胞活性:避免長時間孵育或劇烈離心損傷細胞。
交叉污染:分選前過濾細胞懸液(如40 μm濾網)去除團塊。
七、總結
細胞分選試劑盒通過特異性標記與物理分離技術(磁場或熒光信號)的結合,實現了對目標細胞的高效純化。磁珠法適合快速、低成本的分選需求,而FACS法則在復雜多標志物分選中更具優勢,兩者共同推動了基礎研究與臨床應用的進展。
