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基因組DNA提取常見問題

 更新時間:2023-12-05    點擊量:980
  基因組DNA提取常見問題
 
  你知道基因組DNA提取的常見問題有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  一、DNA提取產(chǎn)量低?
 
  (1)實驗材料量太少。適當增加材料用量。
 
  (2)樣本裂解不充分。適當減少樣品量,用液氮或勻漿器對樣品進行研磨和勻漿,加入裂解液后使其和樣品充分混勻,適當延長裂解時間。
 
  (3)提取材料質(zhì)量不好。保證樣品本身DNA含量,盡量選用富含核酸的組織或新鮮組織提取基因組DNA,樣品采集后應盡快保存在-80℃或液氮中,避免樣品反復凍融或保存時間過久。若樣品DNA含量較少,即使電泳檢測不到明顯的DNA條帶,仍可嘗試進行PCR檢測,建議使用靈敏度高的酶進行擴增。
 
  (4)DNA斷裂或降解。避免因移液槍反復吹吸或反復凍融樣品造成的DNA損傷,及避免在操作過程中帶入外源DNase污染。
 
  (5)若采用試劑盒法(吸附柱法)提取基因組DNA,還有可能因為部分試劑未添加無水乙醇。使用前必須按規(guī)定量添加無水乙醇,溶液使用完后立即蓋緊蓋子。
 
  二、提取的基因組DNA純度低,影響下游酶切、PCR等實驗?
 
  (1)DNA中含有蛋白、多糖、多酚類雜質(zhì)。重新純化DNA,去除殘留蛋白和糖酚。
 
  (2)DNA在溶解前,有乙醇殘留抑制后續(xù)酶反應。重新沉淀DNA,充分揮發(fā)乙醇。
 
  (3)DNA中有金屬離子殘留。增加70%乙醇洗滌次數(shù)。
 
  三、試劑盒法(吸附柱法)提取基因組DNA
 
  (1)DNA鹽濃度過高:在使用漂洗液進行清洗時,可沿吸附柱的管壁四周加入,且加入漂洗液后室溫靜置5min,有助于清洗掉吸附柱膜上殘留的鹽離子。
 
  (2)洗脫的DNA中殘留乙醇:向吸附柱中加入洗脫液前,需室溫靜置2min,讓殘留的乙醇揮發(fā)后進行洗脫。
 
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