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你知道PCR檢測技術(shù)的分類嗎?

 更新時(shí)間:2023-10-07    點(diǎn)擊量:698

分子診斷技術(shù)是指以DNA和RNA為診斷材料,用分子生物學(xué)技術(shù)通過檢測基因的存在、缺陷或表達(dá)異常,從而對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的技術(shù)。其基本原理是檢測DNA或RNA的結(jié)構(gòu)是否變化、量的多少及表達(dá)功能是否異常,以確定受檢者有無基因水平的異常變化,對疾病的預(yù)防、預(yù)測、診斷、治療具有重要意義。那么你知道PCR檢測技術(shù)的分類嗎?讓我們一起來看看吧!

PCR技術(shù)是一種用于擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),基本原理是在反應(yīng)室中模擬細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制,即人為創(chuàng)造核酸半保留復(fù)制條件,使目的DNA在細(xì)胞外完成擴(kuò)增的過程。是體外DNA擴(kuò)增技術(shù)之一,至今已經(jīng)超過30年的歷史。

在1983年,美國人Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(polymerase chain reaction, PCR),這一技術(shù)將DNA的變性原理以及復(fù)性原理加以利用,采用適溫延伸、高溫變性以及低溫復(fù)性,讓核酸片段實(shí)現(xiàn)了體外擴(kuò)增,可將極微量的目標(biāo)DNA特異地?cái)U(kuò)增上百萬倍,從而提高對DNA分子的分析和檢測,因?yàn)镻CR有著很高的靈敏度以及特異性,而且簡便快速,所以這種技術(shù)已經(jīng)成為目前臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室接受程度最高的技術(shù)。同時(shí),PCR技術(shù)又可以分為定量PCR和常規(guī)PCR,定量PCR分為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)和數(shù)字PCR。

圖片1.png

一、普通PCR:

采用普通PCR 擴(kuò)增儀來對靶基因進(jìn)行擴(kuò)增,然后采用瓊脂糖凝膠電泳對產(chǎn)物進(jìn)行檢測,只能做定性分析。

二、熒光定量PCR(RT-PCR):

熒光定量PCR(Real-Time PCR),也叫做qPCR,通過在反應(yīng)體系中加入能夠指示反映進(jìn)程的熒光探針,通過熒光信號的積累來監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物的積累,通過熒光曲線來判斷結(jié)果,并可以借助Cq 值和標(biāo)準(zhǔn)曲線來定量。

qPCR 技術(shù)由于操作過程在封閉體系中進(jìn)行,降低了污染概率,并且可以通過對熒光信號監(jiān)測從而進(jìn)行定量檢測,因此臨床應(yīng)用最為廣泛,已成為PCR中的主導(dǎo)技術(shù)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為:TaqMan熒光探針、分子信標(biāo)和熒光染料。

三、數(shù)字PCR(dPCR):

數(shù)字PCR(DigitalPCR, dPCR, Dig-PCR)通過終點(diǎn)檢測計(jì)算目標(biāo)序列的拷貝數(shù),無需采用內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線即可進(jìn)行精確的絕對定量檢測。

數(shù)字PCR采用終點(diǎn)檢測,不依賴于Ct值(循環(huán)閾值),所以數(shù)字PCR反應(yīng)受擴(kuò)增效率的影響降低,對PCR反應(yīng)抑制物的耐受能力提高,具有很高的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性。

由于具備高靈敏度、高精確度的特點(diǎn),不易被PCR反應(yīng)抑制劑干擾,無需標(biāo)準(zhǔn)品可實(shí)現(xiàn)真正意義的絕對定量,而成為研究和應(yīng)用熱點(diǎn)。

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