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RNA提取的注意事項(xiàng)有哪些?

 更新時(shí)間:2023-10-07    點(diǎn)擊量:743

RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子,同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁,因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段。那么你知道RNA提取的注意事項(xiàng)都有哪些嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、如何保存提取出的RNA?

提取后溶解于RNase-free Water中,RNA樣品建議立即進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn),如需儲(chǔ)存,建議分裝保存于-80℃。避免多次取用樣品,反復(fù)凍融。

二、為什么提取的RNA有降解?

1.使用的組織材料不新鮮。提取RNA應(yīng)采用新鮮的組織材料,或?qū)⑿迈r組織材料用液氮迅凍后置于-80℃保存。

2.提取RNA時(shí)使用的試劑及耗材中混有RNase。

3.提取的組織材料中含有大量?jī)?nèi)源RNase。

三、RNA分離過(guò)程中水相與有機(jī)相分離不wan全,提取的RNA含量低。

可能是氯仿混合不充分,離心時(shí)轉(zhuǎn)速不夠或離心時(shí)間太短。使得回收的RNA水相低于500 µL。

四、如何防止提取RNA過(guò)程中RNA的降解?

1.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的玻璃器皿使用前可于180 ℃干烤8 h以上,塑料制品要用氯仿沖洗。焦磷酸二乙酯(DEPC)是RNase的強(qiáng)烈抑制劑,RNA提取過(guò)程和逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中所用的水用DEPC處理;

2.實(shí)驗(yàn)人員的手為RNase的重要污染源,進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)始終戴手套,并應(yīng)勤換手套;

3.提取的樣品材料應(yīng)盡可能新鮮,如果不能及時(shí)提取RNA,取樣后應(yīng)保存于液氮中。

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