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常見(jiàn)的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法

 更新時(shí)間:2024-02-22    點(diǎn)擊量:813
  細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在一定的生理或病理?xiàng)l件下,遵循自身的程序,自己結(jié)束生命,最后裂解為若干凋亡小體,被其他細(xì)胞吞噬的過(guò)程,也稱為程序性細(xì)胞死亡。細(xì)胞凋亡是多細(xì)胞有機(jī)體為調(diào)控機(jī)體發(fā)育、維護(hù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的方式,凋亡過(guò)程是由基因控制的細(xì)胞主動(dòng)死亡過(guò)程。那么你知道常見(jiàn)的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法有什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
 
  一、基于生物學(xué)功能的方法:
 
  1.Annexin V/PI檢測(cè)磷脂酰絲氨酸 (PS)
 
  在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè);細(xì)胞凋亡早期,PS會(huì)從細(xì)胞膜胞質(zhì)外翻到細(xì)胞膜外側(cè)。Annexin V (膜聯(lián)蛋白V)是一種Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,可與外翻的PS特異性結(jié)合,因此Annexin V 常作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI) 染色液是一種不能穿透細(xì)胞膜的紅色核酸染料,可對(duì)凋亡晚期細(xì)胞及壞死細(xì)胞染色。
 
  Annexin V 經(jīng)熒光素標(biāo)記后作為熒光探針,如Annexin V-FITC ,與PI聯(lián)合(凱基貨號(hào):KGA107)染色后,正常細(xì)胞基本無(wú)熒光(Annexin V-/PI-),早期凋亡細(xì)胞呈綠色熒光(Annexin V+/PI-),晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞則呈綠色和紅色熒光(Annexin V+/PI+)。借助流式細(xì)胞術(shù)即可檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。此外,除了用FITC標(biāo)記Annexin V 之外,也可以用EGFP、PE、APC、mCherry等作為熒光探針,也可以用7-AAD來(lái)替代PI作為核酸染料。
 
  2.JC-1檢測(cè)線粒體膜電位凋亡早期細(xì)胞,線粒體膜通透性增加,線粒體膜電位(ΔΨm)下降甚至消失。線粒體膜電位的下降被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡過(guò)程中最早發(fā)生的生物學(xué)變化。一旦線粒體膜電位被破壞,細(xì)胞凋亡將不可逆轉(zhuǎn)。
 
  二、基于生化標(biāo)記的方法:
 
  1.TUNEL法檢測(cè)DNA片段原位
 
  細(xì)胞凋亡形成的DNA斷裂會(huì)暴露DNA鏈的3’-OH末端,末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)可催化斷裂DNA的3′-OH端的核酸聚合反應(yīng),加入帶有熒光素、過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素標(biāo)記的dUTP,顯色反應(yīng)后可特異地進(jìn)行原位凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。正?;蛟鲋臣?xì)胞幾乎沒(méi)有DNA的斷裂,故很少被染色。TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(凱基貨號(hào):KGA7072)適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測(cè)。對(duì)于經(jīng)過(guò)固定和洗滌的細(xì)胞或組織,只要經(jīng)過(guò)一步染色反應(yīng),洗滌后就可以通過(guò)熒光顯微鏡或激光共聚焦等成像設(shè)備檢測(cè)到凋亡細(xì)胞。
 
  2.彗星電泳檢測(cè)DNA片段化
 
  彗星電泳實(shí)驗(yàn)的原理:當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性因素誘發(fā)細(xì)胞DNA鏈斷裂時(shí),其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞,在細(xì)胞裂解液作用下,細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞,細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴(kuò)散到電解液中,而核DNA由于分子量太大不能進(jìn)入凝膠而留在原位。詳細(xì)操作和數(shù)據(jù)分析可參考干貨|彗星電泳法檢測(cè)DNA損傷-從實(shí)驗(yàn)到數(shù)據(jù)分析。
 
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