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ELISA實驗的關(guān)鍵點

 更新時間:2024-04-01    點擊量:542
  酶聯(lián)免疫吸附測定法 (enzyme-linked immunosorbent assay),簡稱 ELISA,是用于檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法。它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術(shù)。那么你知道ELISA實驗的關(guān)鍵點是什么嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  一、樣本的儲存
 
  合適的保存環(huán)境可以確保生物樣本在后續(xù)實驗和研究中的可靠性和穩(wěn)定性,樣本長期保存建議在-80℃保存,1-2個月內(nèi)在-20℃保存,開展檢測時需分裝后保存4℃,并建議當天短暫保存,單次使用后丟棄剩余部分。
 
  為避免樣本的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和活性受損,盡量避免多次凍融,凍融次數(shù)對檢測結(jié)果的的影響是不容小覷的。經(jīng)測試對比發(fā)現(xiàn):有些因子凍融2到3次甚至已經(jīng)降到非常低的含量水平,如大家經(jīng)常關(guān)注到的炎癥因子IL-1β、IL-15、IL-17、CXCL8等。
 
  二、樣本內(nèi)外源性物質(zhì)
 
  免疫方法檢測中,內(nèi)源性等因素干擾(自身抗體、異嗜性抗體、人抗動物抗體及其他一些結(jié)合蛋白等)、脂血、交叉反應、一些分析前變異(標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等)、基質(zhì)效應甚至檢測設備的不同,均可對檢測結(jié)果造成干擾,引起許多檢測結(jié)果的假性升高或降低,包括激素、各類標志物、藥物和病原微生物的血清學檢測等。
 
  科研人員應充分認識免疫檢測中的各類干擾因素,在出現(xiàn)結(jié)果不符(包括檢測結(jié)果與臨床癥狀不符、檢測預期與文獻不符)時進行原因分析,如檢測的樣本類型是否與所選試劑盒匹配。
 
  三、樣本造模
 
  生物學實驗中影響造模成功的因素很多,需要綜合考慮各種因素,以確保模型的可靠性和準確性:
 
  設置對照:在實驗造模中,設置對照可以幫助確定造模是否成功。例如,實驗組和對照組在實驗處理后表現(xiàn)出不同的生理或生化反應,則可以認為造模是成功的。此外,通過對照還可以評估實驗的可靠性,例如評估實驗結(jié)果的重復性和穩(wěn)定性。
 
  多學科驗證:在生物學實驗中,確定造模和對照是否成功需要考慮多個方面。如:觀察實驗動物病理癥狀、檢測生理指標、檢測生化指標、組織病理學檢查、統(tǒng)計學分析等;
 
  實驗動物:不同種類的實驗動物對模型的反應可能不同。例如,某些藥物在小鼠和大鼠中的反應可能會有所不同。因此,選擇適當?shù)膶嶒瀯游锓N類對于造模成功至關(guān)重要。
 
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