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ELISA實(shí)驗(yàn)操作方法

 更新時(shí)間:2024-08-08    點(diǎn)擊量:614
  ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),用于檢測和定量分析樣品中特定抗原或抗體的存在。ELISA是基于免疫學(xué)原理的一種高靈敏度和高特異性的實(shí)驗(yàn)方法。下面讓我們一起來看看ELISA實(shí)驗(yàn)操作方法吧!
 
  ELISA實(shí)驗(yàn)通常包括以下步驟:
 
  1. 涂覆:將待檢測的抗原或抗體溶液加入到微孔板(通常是96孔板)中,并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個(gè)過程被稱為涂覆。
 
  2. 阻斷:為了防止非特異性結(jié)合,需要在涂覆后加入一種阻斷劑,例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉,以覆蓋孔板上未被固定的表面。阻斷劑可以減少非特異性結(jié)合和降低背景信號。
 
  3. 樣品加入:將待測樣品加入到微孔板中,樣品中的目標(biāo)抗原或抗體與固定在孔板上的抗體或抗原相互作用。
 
  4. 洗滌:通過反復(fù)洗滌孔板,去除未結(jié)合的物質(zhì),以減少背景信號。
 
  5. 探針加入:加入與待測物體特異性結(jié)合的酶標(biāo)記二抗(例如辣根過氧化物酶-HRP)或酶標(biāo)記抗原,使其與樣品中的目標(biāo)物體結(jié)合。
 
  6. 洗滌:再次洗滌孔板,去除未結(jié)合的酶標(biāo)記物。
 
  7. 底物加入:加入一種底物,其與酶標(biāo)記物相互作用,產(chǎn)生可測量的信號。常用的底物是一種可被酶催化產(chǎn)生顏色或熒光的物質(zhì)。
 
  8. 反應(yīng)停止:通過加入一種停止劑,停止底物的反應(yīng),阻止信號進(jìn)一步增加。
 
  9. 信號測量:使用光譜儀或熒光測量儀測量底物反應(yīng)產(chǎn)生的信號,根據(jù)信號的強(qiáng)度來確定樣品中目標(biāo)物體的濃度。
 
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