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ELISA實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題

 更新時(shí)間:2024-08-08    點(diǎn)擊量:615
  ELISA是分子生物學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中常用到的實(shí)驗(yàn)操作之一,相信大家常常會(huì)有這樣那樣的實(shí)驗(yàn)問(wèn)題。下面讓我們一起來(lái)看看ELISA實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題都有哪些吧!
 
  1. 洗板不干凈
 
  解決方法:
 
  ①充分洗滌:如果洗板的時(shí)間不夠,會(huì)導(dǎo)致抗體殘留,陰性對(duì)照會(huì)顯色,嘗試延長(zhǎng)洗板時(shí)間,增加洗板頻率,在洗液中添加表面活性劑Tween-20。
 
  在洗板時(shí)要保證每步都洗滌干凈,充分拍板直至孔內(nèi)沒(méi)有明顯的殘留液體。
 
 ?、诒苊饨徊嫖廴荆簵壢ハ匆汉头跤目贵w時(shí)避免交叉污染,移液槍頭盡可能一次性使用,拍板的濾紙不要反復(fù)使用。
 
  2. 顯色液變質(zhì)或者試劑過(guò)期
 
  解決方法:檢查試劑盒有效期,或使用新的試劑盒并按照說(shuō)明書要求保存試劑盒。每次用剩下的顯色液最好不要回收,或者只回收洗凈的容器裝的顯色液。
 
  3. 試劑稀釋有誤,檢測(cè)抗體/酶結(jié)合物工作液濃度過(guò)高
 
  解決方法:按照說(shuō)明書推薦的稀釋倍數(shù)稀釋抗體。
 
  4. 試劑盒組分未平衡
 
  解決方法:試劑盒每個(gè)組分都需要平衡至室溫后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
 
  5. 混用其他試劑盒試劑
 
  解決方法:保證使用試劑盒內(nèi)完整的一套試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn),不同品牌及不同批次間的試劑可能存在不匹配現(xiàn)象,不同批號(hào)的試劑不要混用。
 
  6. 蒸餾水受酶等污染
 
  解決方法:使用新鮮蒸餾水。
 
  7. 培養(yǎng)箱溫度超過(guò)37℃或反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
 
  解決方法:孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、溫度過(guò)高可能會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加,從而造成本底增高。檢查恒溫箱,確保孵育溫度穩(wěn)定在37℃,按照說(shuō)明書的反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行孵育。
 
  8. 酶標(biāo)板底部有污漬
 
  解決方法:在加完終止液之后,檢測(cè)之前,用75%乙醇浸潤(rùn)的脫脂棉球擦拭酶標(biāo)板底部,確認(rèn)沒(méi)有污漬之后再檢測(cè)。
 
  9. 洗液被污染
 
  解決方法:洗液現(xiàn)配現(xiàn)用,長(zhǎng)期放置會(huì)析出,也可能會(huì)污染,導(dǎo)致背景偏高。
 
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