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PBS緩沖液的配制

2025-02-12 緩沖液是一種能夠抵抗溶液中因添加少量酸或堿而引起的pH變化的液體。通常由弱酸及其鹽或弱堿及其鹽配制而成。許多生物化學反應需要在穩定的pH環境下進行，比如血液就是一個重要的緩沖體系。今天我們來一起學習一下PBS緩沖液吧~一、PBS緩沖液優點PBS的緩沖pH值范圍非常廣,可配置各種pH值的酸、堿、中性緩沖液,是最常見的緩沖體系之一。配制酸性磷酸緩沖液可直接用NaH2PO4,或KHPO,pH范圍在1-5;堿性緩沖液可直接用NaH2PO4,或K2HPO4,,pH范圍在9-12;中性緩...

為什么同一抗體，跑出來不同分子量

2025-02-08 在生物學實驗中，同一抗體在不同條件下進行電泳等分析時，跑出來的分子量卻不一樣，常常會出現這樣的事情。有以下幾個方面因素：一、抗體本身的結構特點抗體是具有4條多肽鏈的對稱結構，包含2條較長、相對分子量較大的相同重鏈（H鏈）和2條較短、相對分子量較小的相同輕鏈（L鏈），鏈間由二硫鍵和非共價鍵聯結形成一個由4條多肽鏈構成的單體分子。抗體存在多種形式，除了常見的單體形式，還可以形成多聚體。比如，IgM抗體在體內通常以五聚體形式存在，而在某些實驗條件下，其聚合狀態可能發生改變，從五聚體...

基因調控網絡：解碼生命的交響樂

2025-02-08 摘要：基因調控網絡（GRNs）是控制基因表達的復雜系統，決定了細胞的身份、功能和命運。理解GRNs對于揭示發育、疾病和進化的奧秘至關重要。本文將深入探討GRNs的組成、動態特性、分析方法及其在生物學中的應用。關鍵詞：基因調控網絡，基因表達，轉錄因子，順式調控元件，系統生物學1.引言生命體由數以萬計的基因組成，但并非所有基因在所有時間都處于活躍狀態?；蛘{控網絡（GRNs）就像指揮家，精確地控制著基因的表達時間和水平，從而協調細胞的活動，構建出復雜的生命體。2.GRNs的組成G...

為何酶不能保存在-80°C冰箱？

2025-02-07 生物實驗室的寶子們，平時做PCR實驗，一定離不開各種酶的使用，而酶一般都保存在-20°C的冰箱中。實驗室除了-20℃冰箱，肯定都還有-80℃的冰箱，那為什么我們要選擇-20℃，而不選擇溫度更低的-80°C的呢?大家有思考過這個問題嗎?酶在-80°C下保存是為了維持其活性和穩定性，但并非所有酶都需要如此低溫保存。以下是專業解讀：1.酶的特性溫度敏感性：酶是蛋白質，高溫易導致變性，低溫則能減緩降解和變性速度。長期保存需求：-80°C能有效抑制酶活性中心的破壞和蛋白水解酶的降解。2...

懸浮細胞的轉染

2025-02-06 一、懸浮細胞都有什么？懸浮生長的細胞是指在體外培養時不依賴于支持物表面，而是在培養液中以懸浮狀態生長的細胞。這類細胞通常來源于血液、淋巴組織，例如某些腫瘤細胞和轉化細胞。懸浮細胞的特點是細胞呈圓形，一般不貼于支持物上，易于大量繁殖。在體外培養的細胞類型中，懸浮細胞可以呈單個細胞或細小的細胞團生長。以下是一些常見的懸浮生長細胞類型：小鼠腹水瘤S180小鼠骨髓瘤NS1和SP2/0人造血系腫瘤細胞U937、HL60、K562人原髓細胞白血病細胞HL-60小鼠白血病細胞WEHI-3人...

慢病毒轉染貼壁細胞全流程詳解

2025-02-06 慢病毒轉染貼壁細胞全流程詳解一、細胞種板將細胞種在12孔板中，每孔1.5×10^5個細胞。每孔加入1mlwan全培養基。二、病毒感染1.待細胞生長至30%～50%時開始轉染。2.將病毒從冰箱取出，放在冰上融化。3.打開生物安全柜，關閉風機，戴好帽子和口罩。4.棄去培養基，用PBS洗三次。5.每孔加入500ulwan全培養基。6.根據公式計算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）=MOIx細胞數/病毒滴度（TU/mL）×1000。7.4小時后，再向孔板中加入500ulwan全培養基...

小分子蛋白的WB該如何？

2025-01-23 WB（WesternBlot）是一種常用的生物化學實驗技術，用于檢測和分析蛋白樣品中特定蛋白質的存在和表達水平。它通過將樣品中的蛋白質分離并轉移到膜上，然后使用特定的抗體識別目標蛋白，并通過化學或免疫檢測方法來可視化這些蛋白質。WesternBlot技術通常包括樣品制備、SDS-PAGE電泳分離、蛋白轉印、封閉和抗體檢測、曝光顯影等步驟。目前WB被廣泛應用于生物醫學研究中，用于研究蛋白質表達、翻譯后修飾以及蛋白質相互作用等。圖1.WB流程圖在日常實驗過程中，小分子蛋白是非常常...

明明凍存的時候細胞長得好好的，怎么一復蘇就完啦？

2025-01-21 不知道大家是否會遇到細胞凍存的時候狀態非常不錯，結果等到需要用到該細胞的時候怎么也復蘇不起來的情況??？或許可能是凍存細胞的時候出現了什么差錯？一.細胞凍存的原則：慢凍，細胞在冷凍過程中，如果降溫過快，會形成大的冰晶，這些冰晶會破壞細胞結構，導致細胞死亡。詳細版本見《細胞凍存的原理是什么？》二.凍存液的配置：常用配置比例：培養基:血清:DMSO=7:2:1適用于大多數細胞系，能夠保證細胞在凍存過程中有較高的存活率。血清:DMSO=9:1適用范圍：適用于需要長時間保存或者具有特別...