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如何優化細胞培養基？

2023-09-20 培養基選擇與優化是細胞培養的重要步驟之一，它直接影響到細胞的生長、增殖和功能表達。那么我們該如何選擇與優化細胞培養基呢？讓我們一起來看看吧！一、培養基選擇：1.細胞類型：根據細胞的來源和種類選擇合適的培養基。不同類型的細胞有著不同的營養需求和生長特性，因此需要選擇能夠滿足其需求的培養基。常見的培養基有DMEM、RPMI1640、MEM等。2.營養需求：細胞通過培養基中的成分來獲取所需的營養物質。根據細胞的需求，可以調整培養基的氨基酸、脂類、無機鹽等成分的配比和濃度。3.補充物...

細胞擴增技術與策略有什么?

2023-09-20 細胞擴增技術與策略是實現細胞大規模增殖的關鍵步驟，可以根據細胞類型、擴增需求和實際情況選擇不同的技術和策略。那么你知道細胞擴增技術與策略有什么嗎?讓我們一起來看看吧！一、傳代培養：1.間歇性傳代：將細胞從培養器具（如細胞瓶或培養皿）中解離并移植到新的培養器具中，以分離細胞，控制細胞密度和細胞增殖速率。2.連續傳代：利用旋轉式培養器具（如旋轉壺、旋轉筒）或生物反應器等，實現細胞的持續增殖。連續傳代可以減少人工處理和移植對細胞的傷害，提高細胞擴增效率。二、懸浮培養：1.攪拌培養：...

PCR管的維護保養方法

2023-09-19 聚合酶鏈式反應(PCR)是基因工程中常用的一種分子生物學技術，PCR管通過模擬體內DNA復制過程快速合成特定DNA片段。其原理基于DNA的復制過程，包括三個步驟：變性、退火和延伸。變性(Denaturation)階段，反應體系中的DNA雙鏈結構在高溫(通常為94°C-98°C)下被分離成兩條單鏈DNA。這一步是通過加熱使兩條DNA鏈斷裂，目的是將DNA的雙鏈結構變為單鏈結構以提供模板。退火(Annealing)階段，溫度被降低至50°C-65°C，此時引物(Primers)能...

如何正確保存抗體？

2023-09-18 抗體保存的是否得當，直接決定了抗體的活性和使用效果，那么我們該如何正確保存抗體呢？讓我們一起來看看吧！一、保存溫度和條件很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小，同時可避免多次在一個管內取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應保存于4°C。收到抗體后，應10,000xg離心20秒，使管口螺紋內的抗體溶液全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗的使用量。分裝量不能少于1...

qPCR實驗的Ct值有什么作用？

2023-09-18 qPCR擴增過程中，擴增產物的熒光信號達到設定的熒光閾值時的所對應的擴增循環數（CycleThreshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡單講，Ct值就是qPCR中起始模板擴增達到一定產物量時，所對應的循環數。那么你知道qPCR實驗中的Ct值有什么作用嗎？讓我們一起來看看吧！一、指數擴增、模板量與Ct值的關系理想情況下，qPCR中的基因經過一定的循環數被指數擴增而積累，擴增循環數和產物量之間的關系是：擴增產物量=起始模板量×（1+En）循環個數。然而qPC...

病毒轉染實驗有何注意事項？

2023-09-14 病毒轉染是指將外源病毒導入真核細胞的技術，用病毒將帶有目的基因的載體整合到細胞的基因組中，以達到長期穩定表達目的基因的目的。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。那么病毒轉染實驗有何注意事項呢？讓我們一起來看看吧！一、病毒安全性問題病毒本身具有一定的危險性，需要在符合生物安全實驗室標準的條件下進行實驗，并遵守相關的實驗室安全操作規范。病毒操作時最好使用生物安全柜。如果使用普通超凈工作臺操作病毒，請不要打開排風扇。病毒操作時...

如何提高電轉效率？

2023-09-14 電轉，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA、mRNA等）導入真核細胞內，來改變細胞的特性，從而達到改造細胞的目的，是實現細胞基因功能和蛋白質表達研究的重要工具。那么該如何提高電轉效率呢？讓我們一起來看看吧！一、細胞收集時：1)在消化貼壁細胞時，一定要注意終止胰酶反應，防止過度消化；最好使用專業的胰酶中和劑；2)在進行細胞離心時，使用低轉速長時間離心，提升細胞的存活率；3)選擇合適狀態的細胞，一般原代細胞可以傳1-2次后使用；盡量挑選迭代次數少...

貼壁細胞培養和懸浮細胞培養的區別是什么？

2023-09-13 細胞培養有兩種基本方式，一種是人工基質上的單層細胞（貼壁培養），另一種是在培養基中自由漂浮（懸浮培養）。那么你知道貼壁細胞培養和懸浮細胞培養的區別是什么嗎？讓我們一起來看看吧！來自脊椎動物的大多數細胞，除了造血細胞系和少數其他細胞系，都是貼壁依賴性的，必須在經過專門處理以允許細胞粘附和擴散的合適基質上培養。然而，許多細胞系也適用于懸浮培養。同樣，大多數市售昆蟲細胞系在貼壁培養或懸浮培養中生長良好。懸浮培養的細胞可以保存在未經組織培養處理的培養瓶中，但隨著培養體積與表面積的增加...